培养箱中的多板位活细胞监测分析系统--IncuCyte 赛多利斯（上海）贸易有限公司品牌：Sartorius 两板位型号：IncuCyte SX1 六板位型号：IncuCyte S3/SX5 培养箱内运行示意图 目前，大部分的细胞检测方法采用的仍然是终点法—比如...
基于实时动态活细胞成像技术的人肝胆管癌细胞（RBE）稳定细胞株构建抗性筛选实验技术介绍： 1、稳定株构建抗性筛选实验方案（设置正常对照组和Puro抗性浓度梯度给药组）： 2、人肝胆管癌细胞（RBE）稳定细胞株构建抗性筛选动态成像时间间隔照片：人肝胆管癌细胞（RBE） 0h ...
固定过的电镜样本，在运输过程中，固定液切勿冷冻结冰。
细胞铺板后，细胞培养板超净台内水平放置3分钟，再将96孔板水平放入实时动态活细胞成像活细胞（InCucyte）系统，设置明场和绿色荧光）20X或10X成像，每孔成像4个视野。数据分析后，作为细胞接种0h的细胞杀伤/毒性基数。
预添加细胞凋亡APO-488探针(CellEvent® Caspase-3/7 Green ReadyProbes，绿色荧光）给药后，放置镶嵌有 IncuCyte ZOOM（实时动态活细胞成像观察平台）的CO2培养箱内培养与非浸入细胞培养体系免洗脱式动态监测。
THP-1细胞通过PMA或者LPS诱导，可成巨噬细胞，半悬浮半贴壁生长。永生化的人巨噬细胞，就是一个稳定的巨噬细胞系，可连续传代。不需要诱导，已具有巨噬细胞的特征。
实时动态活细胞成像活细胞（InCucyte）系统镶嵌在CO2培养箱中，温度、湿度、O2和CO2浓度均与CO2培养箱一致。所以，可不取出细胞培养板。设置时间轴，可每1h或24h自动检测细胞增殖一次，并数据归集于同一个数据库。
出于好奇与兴趣爱好，而非学术或研究项目所需。我们自筹经费，将开展NK92自然杀伤细胞对500种细胞增殖、凋亡和杀伤研究。预计在5年内，完成所有实验。
药物配置总原则：首先，要明确药物在不同溶剂中药物的溶解度并配置最大溶解度的药物母液（或接近最大溶解度）；其次，使用配置母液的溶剂配置各个给药浓度1000倍的二级母液；再次，用预热的完培或条件培养基，分别将各个浓度梯度的二级母液稀释1000倍给药。
如何高效快速建立Raw264.7-LPS炎症模型？
a、Raw264.7细胞-LPS炎症模型建立---LPS最佳浓度筛选；
b、Raw264.7细胞-LPS炎症模型建立-LPS浓度与NO表达筛选。
细胞冻存液经典配方为基础培养：FBS（CytoBiotech/驷拓柏腾,Cat# FBS-F-500）：DMSO（Sigma#D2650-100ML）=7:2:1
“黑胶虫”的消杀最好从细胞复苏开始，一旦细胞贴壁生长后，“黑胶虫”清洗和消杀难度大幅度增加。被“黑胶虫”污染的细胞，400倍显微镜下可见有小黑点在振动。有时呈点状，有时呈小片状，。类似布朗运动。“黑胶虫”常与细胞背景脏污染现象一起发生。
细胞复苏核心操作为冻存管1/2处以下浸入37C°水浴锅，按照4次/秒的频率晃动，确保细胞快速解冻。细胞复苏后，将1.8ml的冻存管用5ml离心管适配配平，直接1200转离心5分钟取上清（冻存液），不需要添加完培稀释冻存液再离心。
细胞被不动杆菌污染污染后，背景出现大量杆状黑色物体，也像虫子，但不游动。越来越多，培养基也不变黄。只能超超高剂量的O-V3-B5消杀，不能预防。
借助实时动活细胞成像系统的细胞侵袭迁移TransWell实验，不需要去掉上室基顶膜结晶紫染色。并每个下室孔可实现0h、24h、48h、72h和96h细胞侵袭迁移细胞照片和数据的采集，不需要接种多个小室以时间点来采集数据。
常规细胞培养时，按照3ul（O-V3-B5）/ml完全培养基剂量，添加高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5）到预热的完培中，换液培养，便可预防常见的“细胞背景脏小黑点”污染。
悬浮生长的细胞，用慢病毒感染构建稳定株，还是腺病毒感染瞬时表达呢？不管慢病毒还是腺病毒感染悬浮细胞，若带有荧光报告基因（GFP、RFP等）可直观判断感染效率。
细胞消化、传代、接种等操作，尤其细胞冻存时，为何均需要缓慢操作，避免产生气泡呢？小体积吸取液体（培养基或试剂材料）或移液，避免产生大量气泡。
“润湿消化法”消化传代细胞操作步骤如下：a、吸弃或倒掉培养瓶内所有培养基。b、预热的PBS清洗两遍，分别4ml和3ml。c、吸取500ul含EDTA的胰酶滴加入T25瓶内，轻轻水平晃动。d、待胰酶均匀润湿细胞表面后，计时10秒。吸出所有的胰酶，盖上盖。e、将T25瓶水平放置37度培养箱，孵育消化细胞2分钟。f、无菌环境，向T25瓶内添加3ml完培（或专培，依据细胞培养条件而定。本操作视频以H...
转染时，血清含量不影响转染效率；但未预热的培养基会影响转染效率。转染后 6-12h时，按照3ml /6孔板单孔，换液H-DMEM条件培养基（含5ûS，含糖25mM，不含双抗）扩增48h病毒。
