人前列腺癌细胞（LNCaP）培养技巧和经验

第一、细胞背景和来源与研究价值：

1、细胞背景与来源

人前列腺癌细胞（LNCaP）别称：LNCaP clone FGC、LNCaP-ATCC等。

来源：该细胞系由学者 Horoszewicz 等人于 1977 年成功建系。它源自一位 50岁白人男性 的左锁骨上淋巴结穿刺活检组织，该患者已被确诊为转移性前列腺癌。

STR鉴定：目前各大细胞库出售的LNCaP均有明确的STR指纹图谱，购买时可要求提供鉴定报告以确保细胞身份正确。

2、核心生物学特性（科研价值所在）

LNCaP之所以在科研中不可替代，主要归功于它保留了前列腺癌的许多关键临床特征：

雄激素依赖性（Androgen-dependent）：细胞内存在高亲和力的特异性雄激素受体（AR），但其配体结合域有一个经典的 T877A 点突变。这意味着它的生长高度依赖雄激素（如双氢睾酮 DHT），同时也对雌激素有一定反应。

分泌前列腺癌标志物：在雄激素的刺激下，LNCaP细胞会显著上调并分泌前列腺特异性抗原（PSA）和前列腺酸性磷酸酶（PSAP/PAP）。这一特性使其常被用来评估药物对前列腺癌内分泌治疗的敏感性。

倍增时间：体外倍增时间约为 60小时，属于生长相对缓慢的细胞系。

第二、人前列腺癌细胞（LNCaP）细胞特征代码：

STR-11339-LNCaP-1640-15%FBS-TryEDTA=3min-Trans=48h-G2=60h

细胞特征代码描述：TryEDTA为细胞消化条件和时间，TransM为细胞换液周期（*1.5T为下次换液的总体积为上次的1.5倍）；DT为细胞倍增周期。Puro为稳定株筛选时嘌呤霉素抗性有效浓度。即：

STR-11339：细胞身份认证的“分子指纹”，确保细胞系 purity；

1640-15%FBS：基础培养体系（85% 1640培养基+15%胎牛血清）；

TryEDTA=3min：消化条件（胰酶-EDTA处理3分钟）；

Trans=48h：换液周期（每48小时换液1次，*1.5T表示下次总体积为上次1.5倍）；

G2=60h：细胞倍增周期（约60小时完成一次分裂）；

第三、人前列腺癌细胞（LNCaP）培养条件（贴壁抱团生长）：

培养条件：85% 1640+15% FBS+5% CO2+37度++O2（通气）+95%湿度+1X双抗（可不添加）

A、1640：含谷氨酰胺，含糖量11.1mM，Corning#10-040-CVRC；

B、FBS（胎牛血清）：CytoBiotech(驷拓柏腾)，Cat#FBS-F-500；

第四、细胞特点、培养技巧和经验：

1、人前列腺癌细胞（LNCaP）易脱落，通常使用吸附能力强或包被过胶原的培养瓶皿培养。但我们使用Jet的培养瓶，未见明显脱落，反而抱团生长，很紧凑。低密度接种细胞，长期体外同一个瓶皿培养后，形成克隆或细胞簇，很难消化。

2、细胞消化时，用润湿消化法，可增加消化效率，减少离心或胰酶浸泡对细胞的损伤。使用润湿消化法时，可依据细胞团或簇的大小，适当增加细胞润湿的时间到1分钟。

3、细胞生长方式（抱团和成簇），导致转染siRNA和质粒的效率很低，细胞转染难度很大。甚至常规滴度的慢病毒，感染效率也很低。提高病毒感染效率的办法如下：

A、消除抱团感染法：通过润湿消化法将细胞打成尽可能小的细胞簇（甚至单细胞）。接种后观察，在它们刚刚贴壁但尚未重新聚集成大团块时（通常是接种后4-6小时，或次日早间），立刻进行转染或加病毒。这个时候的细胞呈半单层状态，表面积暴露最大，效率至少能提升2-3倍。

B、使用助转染试剂法：Polybrene（助转剂）：在加病毒的同时加入4-8 μg/mL的Polybrene，它能中和细胞表面电荷，促进病毒颗粒与细胞膜的结合。（注：LNCaP对Polybrene毒性有一定耐受，但感染后24小时务必换液）。

C、离心感染法（Spinoculation）：将细胞、病毒、Polybrene混合好后，用平角转子在离心机里 1000 rpm (约200g) 离心 30-60分钟（室温或37℃均可）。离心力会强迫病毒颗粒撞击并附着在细胞表面，能突破LNCaP致密的细胞连接屏障。

D、分段感染：如果一次感染不进去，可以在第一次加病毒后12-18小时，补加一次新鲜病毒液。但增加病毒滴度或感染时间，会影响细胞的活力。