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如何让细胞培养基中欢快游泳的杆菌“躺平”?

作者:Cell Gao

                  “动杆菌”污染的判断

动杆菌污染非常容易分辨,有以下特点:

1、在培养基中快速游动,甩着“小尾巴”(鞭毛)。

2、约8分钟倍增一代。所以,细胞一旦出现动杆菌污染,即使上午9点换液后背景很干净;上午11点在观察,会发现大量“游泳健将”在培养基中穿梭。

3、污染12h以上,培养基变浑浊,有沙粒状。
4、在10X镜下,可明显分辨动杆菌的形态。


                   “ 动杆菌”污染的治疗方法

1、【活污染物清洗】弃掉培养基,分别5ml、4ml和3ml预热的PBS(娇嫩细胞用预热的基础培养基,例如:LX-2细胞、293T细胞、BV2细胞等)或完培(T25瓶剂量),清洗细胞3遍。

2、【污染物高剂量消杀】T25瓶换液2ml的预热的完全培养基后,添加20ul多能高效细胞微生物防治试剂(O-V3-B5)到T25瓶内。轻轻摇匀,再培养箱水平培养30min。

3、【死亡的污染物清洗】30min后,弃掉完全培养基,按照4ml(预热的PBS或完培)/T25瓶的剂量,清洗细胞3遍。

4、【污染物中剂量持续消杀】换液5ml预热的完培后,按照30ul(O-V3-B5)/T25瓶/5ml完全培养基的剂量,添加多能高效细胞微生物防治试剂(O-V3-B5)到T25瓶内,再培养箱水平培养24h。

5、【消杀后观察成像】消杀24小时后,显微观察并拍照。

6、【连续消杀】按照1-5步骤每48小时换液治疗一次,连续治疗4天,可完全清除“   动杆菌”的污染。

7、【巩固治疗】治疗4天后,换预热的完培后,再按照5ul(O-V3-B5)/ml完全培养基剂量,添加高效细胞微生物防治试剂(O-V3-B5)到预热的完培中,换液,并持续培养2天。

                    “ 动杆菌”的预防方法

常规细胞培养时,添加双抗可预防“动杆菌”。按照1ml完培内含1.5ul的多能高效细胞微生物防治试剂(O-V3-B5,预防剂量为1.5ul/ml),可预防“   动杆菌”。

备注:

1、细胞操作直接接触,或者试剂材料表面未充分消毒,非常容易导致“ 动杆菌”污染。

2、“动杆菌”污染细胞后,24h内通常容易消杀和清除,对细胞生长增殖影响不大。超过24h,“ 动杆菌”开始以细胞为营养物,会“掏空”细胞,导致细胞膜通透,DNA泄露。状态差,大量死亡。

3、含有“动杆菌”污染的细胞,清洗、换液等操作过程中,废液和废固体均分别收集并消毒出来,避免交叉污染。
4、此方法仅适合细胞体外培养实验所遇到的微生物污染预防和治疗,不能用于临床、人体或食品添加等领域或行业。
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