如何让细胞培养基中欢快游泳的杆菌“躺平”?“动杆菌”污染的判断 动杆菌污染非常容易分辨,有以下特点: 2、约8分钟倍增一代。所以,细胞一旦出现动杆菌污染,即使上午9点换液后背景很干净;上午11点在观察,会发现大量“游泳健将”在培养基中穿梭。 1、【活污染物清洗】弃掉培养基,分别5ml、4ml和3ml预热的PBS(娇嫩细胞用预热的基础培养基,例如:LX-2细胞、293T细胞、BV2细胞等)或完培(T25瓶剂量),清洗细胞3遍。 2、【污染物高剂量消杀】T25瓶换液2ml的预热的完全培养基后,添加20ul多能高效细胞微生物防治试剂(O-V3-B5)到T25瓶内。轻轻摇匀,再培养箱水平培养30min。 3、【死亡的污染物清洗】30min后,弃掉完全培养基,按照4ml(预热的PBS或完培)/T25瓶的剂量,清洗细胞3遍。 4、【污染物中剂量持续消杀】换液5ml预热的完培后,按照30ul(O-V3-B5)/T25瓶/5ml完全培养基的剂量,添加多能高效细胞微生物防治试剂(O-V3-B5)到T25瓶内,再培养箱水平培养24h。 5、【消杀后观察成像】消杀24小时后,显微观察并拍照。 6、【连续消杀】按照1-5步骤每48小时换液治疗一次,连续治疗4天,可完全清除“ 动杆菌”的污染。 7、【巩固治疗】治疗4天后,换预热的完培后,再按照5ul(O-V3-B5)/ml完全培养基剂量,添加高效细胞微生物防治试剂(O-V3-B5)到预热的完培中,换液,并持续培养2天。 “ 动杆菌”的预防方法 常规细胞培养时,添加双抗可预防“动杆菌”。按照1ml完培内含1.5ul的多能高效细胞微生物防治试剂(O-V3-B5,预防剂量为1.5ul/ml),可预防“ 动杆菌”。 备注: 1、细胞操作直接接触,或者试剂材料表面未充分消毒,非常容易导致“ 动杆菌”污染。 2、“动杆菌”污染细胞后,24h内通常容易消杀和清除,对细胞生长增殖影响不大。超过24h,“ 动杆菌”开始以细胞为营养物,会“掏空”细胞,导致细胞膜通透,DNA泄露。状态差,大量死亡。
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细胞培养技巧与经验
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