共聚焦皿细胞划痕操作技巧和经验

1、预先取一个无菌的100mm细胞培养皿。分别用黑色和红色记号笔，通过皿中心点画两条直线，相互垂直。

2、将细胞贴壁过夜的35mm共聚焦放置上述1中标记过的100皿上，共聚焦皿的中心点与100mm皿的中心点重合。

3、准备10ul移液器和10ul无菌吸头，并匹配。

4、打开35mm共聚焦皿盖，用10ul枪头（移液器倾斜45度效果最佳）沿着黑色线条从共聚焦皿内镶嵌的15mm载玻片边缘开始划痕（移动），到另一边缘结束（划痕的直径为15mm）。

5、盖上盖，将35mm共聚焦皿旋转90度。

6、用10ul枪头沿着红色线条从共聚焦皿内镶嵌的15mm载玻片边缘开始划痕（移动），到另一边缘结束（划痕的直径为15mm）。

7、盖上盖，4倍镜下观察划痕的细胞，并拍照划痕区域（十字形状）。

8、换液或造模，再次拍照。

9、放置CO2培养箱培养24h结束，再次拍照。

备注：其他细胞孔板培养时，没有划痕器，也可参考此方法。通过每孔中心点做红黑线，可批量细胞划痕96孔板、48孔板...6孔板。