图123分别为转染239TLX、293T、293T/17细胞24h的转染效率曲线和柱状图;图4为转染293TLX细胞24h照片;图5为转染293T细胞24h照片;图6为转染293T/17细胞24h照片;图789为转染前239TLX细胞、293T细胞、293T/17细胞照片。细胞转染&慢病毒包装实验方法技巧经验,以下操作以6孔板单孔转染为例：
基础条件：转染时细胞融合度达到：90% 至95%，各种质粒浓度大于800ng/ul。
1、准备2个0.6ml EP管，臭氧消毒3分钟后盖上盖，分别标记A 管和B管。2、准备转染试剂（TransVB-Hi转染试剂)、 H-DMEM基础培养基（不含FBS）、无双抗 H-DMEM完全培养基（含FBS=5%，含糖25mM）、目的质粒（mKate2-Puro），辅助三质粒（PLP1、PLP2 、PVSV-G）。a、转染时，细胞融合度需达到90%最合适（100%过高，培养基很快发黄，影响转染效率）。b、在转染前1小时，换37度预热过不含双抗的完培800ul/孔（通常含FBS 5% ，此处血清不影响转染效率。但未预热的培养基会影响转染效率）；转染前也可不换液（私信索取）。c、将A 管和B管，分别加入 200ul H-DMEM基础培养基（不含双抗，不含血清）。盖上盖贴封口膜。d、【质粒稀释】：取3ug目的质粒（mKate2-Puro），3种辅助质粒各1ug，按照目的质粒、PLP1质粒、PLP2 质粒 、PVSV-G质粒的先后顺序加入到含200ul H-DMEM基础培养基的 A 管中；轻轻吹打混匀（8-10次），贴封口膜，放置超净台（室温）静止5分钟，形成“A-Vector 复合物”。e、【转染试剂TransVB-Hi稀释】：把10ul的“TransVB-Hi细胞转染试剂”加入到含200ul H-DMEM基础培养基的B管，轻轻混匀（吹打8-10次）。f、将稀释后的转染试剂TransVB-Hi（B管）加入稀释的质粒A管中（切记此混合的顺序不能反向进行），轻轻混匀(不能震荡或旋涡，吹打3-5次），盖上盖，贴封口膜。放超净台（室温）放置 15 min，形成Trans-VB-Vector 复合物。a、将上述A管中大约400ul Trans-VB-Vector 复合物均匀（200ul枪头+10ul枪头）滴加入6孔板单孔，加完轻轻晃动。b、放入培养箱（ 37℃，5% CO2）正常培养，或放入实时动态活细胞成像系统监测转染效率。c、转染后监测培养6h后，目的细胞开始表达mkate2红色荧光。d、转染后 6-12h时，按照3ml /6孔板单孔，换液H-DMEM条件培养基（含5%FBS，含糖25mM，不含双抗）扩增48h病毒。5、病毒扩增、收集和纯化。另有笔记描述，请自行搜索。
