图1：40倍成像气泡，图2：40倍成像细胞；
图3：100倍成像气泡，图4：100倍成像细胞；
图5：200倍成像气泡，图6：200倍成像细胞。
细胞消化、传代、接种等操作，尤其细胞冻存时，为何均需要缓慢操作，避免产生气泡呢？
看完上述不同倍数成像的气泡及被气泡包裹的细胞，你是否有新的感悟呢。
第一、气泡为何产生？
a、有气体进入液体，不"溶解"所致。
b、气体快速进入液体，还未充分溶解或排出所致。
c、特殊处理或操作后，形成的“气包水”，或者“水包气”的形态，并维持这一状态。
d、密闭体系，液体外排速度过快，大气也快速进入体系内，竞争排放或溶解形成的气泡现象。
第二、细胞操作如何避免气泡产生？
a、小体积吸取液体（培养基或试剂材料）或移液，避免产生大量气泡。b、缓慢充分吸取液体，不给气体进入移液器枪头的机会。例如：用100ul量程的移液器，调整50ul刻度，从500ul的药物母液中吸取50ul操作的移液操作如下：先排出移液器的气体（排空气），再枪头插入药物母液液体1/2总体积处，缓慢吹打后，充分吸取药物，并缓慢加入待稀释的无菌管内。而不是用200ul或1ml量程的移液器，调整50ul刻度，插入液体内再排空气，快速吹打或吸取操作。c、特殊处理或操作后，形成的气包水，或者水包气的形态，并维持这一状态。第三、气泡产生了如何解决？
a、常规中型培养体系内（500ul-5ml），少量气泡，随时温度或时间的变化，会自然消除，不必担心。b、小体系中（500ul以下，或微孔板）的气泡，需要使用更小装置或耗材吸取。例如：96孔细胞培养板给药时，产生了少量气泡，成像时会对焦不准，或造模时影响。需要使用200ul或100ul量程的移液器，调整到小体积（10ul），再套上10ul的枪头。用10ul枪头接触孔板内气泡的表面，缓慢吸取气泡。待气泡吸进10ul枪头内时，再缓慢将枪头内的液体排到孔内（避免体积或药物量减少，而影响实验）。最后弃掉枪头（内有吸出的气泡）。细胞爬片，盖玻片等操作时常也会产生气泡，解决办法同此。c、大体系或超大体系的液体混合或排放（5ml以上），在混合前，尽量先“排空气”操作，再混合。例如：将密封的500ml H-DMEM培养基分装成45ml/管。无菌操作开盖后，用移液管吸取分装到50ml离心管内，而不是倒置培养基瓶，向50ml离心管内大幅度倾倒（小幅度倾倒，无气泡也可接受）。移液管吸取这一操作，其实起到了“排空气”的作用。
