细胞侵袭迁移TransWell实验操作步骤、方法、技巧和经验：a、【材料准备】预先4度预冷1ml加长枪头、H-DMEM基础培养基和5ml离心管，消毒剪刀。b、【Matrigel基质胶解冻】从负20度冰箱取出预先冰上分装的50ul/管的Matrigel（基质胶，Corning#356234）），4度解冻。c、【Matrigel基质胶取材准备】超净台，用无菌剪刀剪掉1ml加长枪头的吸头处1.5cm（约占整个枪头的1/6），使吸头孔变粗平整。d、【Matrigel基质胶包被稀释】超净台内冰上，按照1:80的稀释比例，用剪平的枪头吸取2972.5ul H-DMEM基础培养基和37.5ulMatrigel基质胶，加入预冷的5ml离心管内，混匀。e、【Matrigel基质胶包被】预先将小室从原24孔TransWell细胞培养板的BC行，分别移到A行和D行。再按照100ul/Well的剂量，用剪平的预冷枪头吸取稀释过的基质胶，垂直添加到TransWell细胞培养板小室底部。轻轻晃动，自然铺平。避免气泡或月牙状产生。f、【Matrigel基质胶固化】将包被了基质胶的TransWell细胞培养板放入37度CO2培养箱，固化30分钟。g、【Matrigel基质胶废液去除】用100ul量程的移液器，调整到95ul刻度，缓慢（不接触底部）吸出小室内的培养基。h、【细胞计数和接种】按照细胞计数的基数，用H-DMEM基础培养基配置细胞单悬液（20K/Well，100ul），并接种到包被和固化过基质胶的小室内（上室） 。i、【下室补完培】将TransWell细胞培养板B行和C行，每孔分别添加750ul H-DMEM完全培养基（含FBS 10%）。j、【上室复位共培养】再将接种有细胞的小室（20K/Well，100ul），分别从A行和D行，放入B行和C行的孔内，一一对应。k、【侵袭到下室细胞成像准备】再将小室，分别从B行和C行的孔内移到A行和D行孔内，一一对应。l、【侵袭到下室细胞成像】将24孔TransWell细胞培养板，放入实时动活细胞成像系统内，设置明场成像。其数据为0h的基础数据。m、【上室复位共培养】成像结束，超净台内将24孔TransWell细胞培养板小室分别从A行和D行，放入B行和C行的孔内，一一对应。n、【上室复位共培养24h】再将24孔TransWell细胞培养板水平放置CO2培养箱，37C°培养24h。o、【上室复位共培养24h、48h、72h并成像】每24h，取出TransWell细胞培养板，移开上室（操作同k-m）放入实时动活细胞成像系统内成像一次。共培养72h或96h，检测4或5个时间点。p、【数据分析与比较】数据分析，导出时间间隔侵袭下室的照片中细胞数目或细胞汇合度，并差异分析。
