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黑胶虫还是不动杆菌污染？有救！

作者：Cell Gao

图1：不动杆菌污染照片集；

图2：Raw264.7细胞被不动杆菌污染照片；

图3：治疗后的Raw24.7细胞照片。

第一、不动杆菌污染治疗方法和技巧：

1、【活污染物清洗】收集培养基上清到预先标记的50ml离心管，分别5ml、4ml和3ml预热的PBS或完培（T25瓶剂量），清洗细胞3遍。

2、【污染物超高剂量消杀】T25瓶换液2ml的预热的完全培养基后，添加30ul多能高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5）到T25瓶内。轻轻摇匀，再培养箱水平培养30min。

3、【死亡的污染物清洗】30min后，收集培养基上清到预先标记的50ml离心管，按照4ml（预热的PBS或完培）/T25瓶的剂量，清洗细胞3遍。

4、【污染物超高剂量持续消杀】换液5ml预热的完培后，按照75ul（O-V3-B5）/T25瓶/5ml完全培养基的剂量，添加多能高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5）到T25瓶内，再培养箱水平培养24h。

5、【消杀后观察成像】消杀24小时后，显微观察并拍照。

6、【连续高剂量消杀】按照1-5步骤每48小时换液治疗一次（收集上清，消毒处理，避免交叉污染），连续治疗12天。

7、【高剂量巩固治疗】治疗Day12后，换预热的完培后，再按照12ul（O-V3-B5）/ml完全培养基剂量，添加高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5）到预热的完培中，换液。并持续3天。

8、【正常培养】使用不含双抗，不含O-V3-B5的完培培养治疗后的细胞，观察96h。若细胞背景无黑色杆状物质，表明已经彻底清除了不动杆菌的污染。
9、【高温高压或臭氧消杀废液废物】将不动杆菌污染清洗、治疗等操作过程中使用过的所有耗材、试剂，固液分开收集。在实验结束后，高温高压灭菌消杀（121C°，30分钟）或者臭氧消杀（30分钟），以免交叉污染。

第二、不动杆菌污染预防方法：

常规细胞培养时，添加双抗、三抗，甚至高剂量的高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5）都很难预防“不动杆菌污染细胞”。只能通过控细胞源头，严格无菌操作，少直接接触，不交叉污染，污染隔离消毒丢弃或治疗来消杀不动杆菌。

备注：

1、完培是否含双抗，均不影响多能高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5）治疗不动杆菌污染的效果。通过超高剂量消杀和高剂量巩固治疗，15天内可彻底清除不动杆菌污染。

2、细胞被不动杆菌污染污染后，背景出现大量杆状黑色物体，也像虫子，但不游动。越来越多，培养基也不变黄。不动杆菌污染后，很难通过常规的双抗或三抗消杀。比支原体的消杀难度大很多。甚至使用多能高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5）高剂量也很难消杀；只能通过超超高剂量【15ul（O-V3-B5）/ml完全培养基的剂量）】才能彻底消杀。

3、此方法仅适合细胞体外培养实验所遇到的微生物污染预防和治疗，不能用于临床、人体或食品添加等领域或行业。

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文章分类：研究案例

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