遇见了真正的“黑胶虫”，如何治疗？

                                     “黑胶虫”污染治疗方法

a、37℃水浴锅快速震荡复苏细胞至绿豆大小的冰粒（详见细胞复苏操作过程视频），从水浴锅取出（停止复苏工作），冻存管表面喷洒75酒精。

b、超净台内取A管内高剂量工作液2ml，移液到预先标记的5ml离心管B内。再吸取复苏过的细胞冻存液（单悬液），重悬混匀。

c、1200转离心5分钟后，超净台内弃掉上清，保留细胞沉淀。

d、再取A管内高剂量工作液2ml，重悬细胞沉淀，混匀。

f、1200转离心5分钟，弃掉上清。

3、【高剂量消杀】用5ml的完全培养基，重悬B管内的细胞沉淀，再添加60ul多能高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5 ，消杀剂量为12ul/ml）母液。混匀后，接种T25瓶A，垂直放置37℃培养箱，消杀30分钟。

4、【高剂量上清接种与消杀】吸取T25瓶A内细胞上清到60cm细胞培养皿或T25瓶B，放入CO2培养箱，水平培养消杀48h。

5、【细胞沉淀中剂量消杀】T25瓶A内自然沉降的细胞沉淀，用5ml的完全培养基重悬，再添加35ul多能高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5 ，消杀剂量为7ul/ml）母液。混匀，放入CO2培养箱，水平培养消杀48h。

7、【消杀48h观察】培养消杀48h后，显微观察（是否有震动的小黑点和背景脏现象）和拍照。T25瓶A和B，均换液5ml的完全培养基，再添加35ul多能高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5，消杀剂量为7ul/ml）母液，轻轻晃动混匀。

8、【连续消杀10Day】每48h观察和换液一次。换液时，每1ml完培内含7ul多能高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5 ，消杀剂量为7ul/ml），连续消杀10天，可完全清除“黑胶虫”污染。如下图2：被“黑胶虫”污染的IMA-2.1细胞治疗72h后，不同视野照片集。

                                    “黑胶虫”预防方法

常规细胞培养时，添加双抗、三抗，不能预防和消杀“黑胶虫”。按照1ml完培内含6ul的多能高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5，预防剂量为6ul/ml），可预防“黑胶虫”。

备注：

1、“黑胶虫”的消杀最好从细胞复苏开始，一旦细胞贴壁生长后，“黑胶虫”清洗和消杀难度大幅度增加。

2、含有“黑胶虫”污染的细胞，清洗、换液等操作过程中，废液和废固体均分离收集并消毒出来，避免交叉污染。

3、此方法仅适合细胞体外培养实验所遇到的微生物污染预防和治疗，不能用于临床、人体或食品添加等领域或行业