细胞杀伤/毒性检测】方法介绍---基于实时动态活细胞成像(InCuCyte)平台【细胞杀伤/毒性检测】方法和原理介绍 细胞计数铺板、种瓶或皿贴壁过夜后,按照实验方案给药时预添加细胞杀伤/毒性Ki-612或Ki-488探针(绿色荧光YOYO-1或红色荧光YOYO-3)给药后,放置镶嵌有 IncuCyte ZOOM(实时动态活细胞成像观察平台)的CO2培养箱内培养与非浸入细胞培养体系免洗脱式动态监测。设置 IncuCyte ZOOM明场相差、绿色荧光和红色荧光显微自动拍照参数,按照2h/次、3-4个视野/孔/次动态拍照(24孔可设置16个视野/次,其他孔板参考仪器参数)。IncuCyte ZOOM系统自动时间间隔拍照,明场白光下捕捉每个视野或每个孔内细胞形态、面积的变化和细胞汇合度(Phase Object Confluence (Percent))变化;绿色荧光监测死亡细胞的数目(Green Object Count (1/Well))、荧光强度、面积大小;红色荧光监测活细胞细胞核的数目(Red Object Count (1/Well)),并通过 IncuCyte ZOOM自动软件和数据库分析,形成明场(白光)、绿色荧光(死亡细胞计数)和红色荧光(活细胞计数)通道连续时间间隔内细胞照片、视频、数值和曲线。 活细胞实时动态计数原理:通过makte2-慢病毒体系感染的细胞,在活细胞状态下(包括细胞单悬液状态)细胞核持续稳定发出明亮的红色荧光。荧光显微镜成像后,红色细胞核与周围的其他细胞可区别,并被 IncuCyte ZOOM(实时动态活细胞成像观察平台)软件自动识别、计数和分析。 1、“润湿消化法”消化细胞,不用离心去除胰酶,稀释后直接使用。 “润湿消化法”消化细胞详细操作步骤,请本公众号搜索【“润湿消化法”消化传代细胞操作步骤】和【“润湿消化法”操作过程视频】 2、细胞计数。 A、细胞铺板后0h细胞杀伤/毒性检测:细胞铺板后,细胞培养板超净台内水平放置3分钟,再将96孔板水平放入实时动态活细胞成像活细胞(InCucyte)系统,设置明场和绿色荧光)20X或10X成像,每孔成像4个视野。数据分析后,作为细胞接种0h的细胞杀伤/毒性基数。 96孔细胞培养板铺板详细操作过程视频,请本公众号搜索【96孔板铺板操作过程视频】。 C、细胞给药后连续时间点细胞杀伤/毒性检测: 4、细胞杀伤/毒性检测数据分析和导出。 A、细胞杀伤/毒性数据导出: B、活细胞动态计数增殖数据导出: D、细胞杀伤/毒性时间间隔照片: E、细胞杀伤/毒性过程视频: 更多,请关注后续笔记文章。 |