电镜样本制备操作步骤和注意事项来源:Cell Gao 1、细胞给药或造模时间点到,预先在一块新的24孔板(24孔板标记为B,电镜固定)对应孔内添加250ul电镜固定液。再用1ml移液器吸弃24孔板A板孔内的培养上清。每孔添加预热的PB(500ul/Well for 24Plate)轻轻晃动漂洗后,吸弃PBS。 2、24孔板A板每孔添加250ul电镜固定液,室温避光固定10min。 3、使用弯头超薄镊子将细胞爬片再转移24孔板B板的对应孔(预先添加有250ul电镜固定液),室温避光固定20min。 4、将24孔板B板板贴上封口膜,水平放4°保存。 5、若邮寄运输,在将24孔板整体固定(避免漏液)后4度蓝冰冰袋运输,若为负20度冰箱冻过的冰袋,一定用棉花或者报纸隔开冰袋,切勿冷冻结冰。 6、注意事项:固定过的电镜样本,在运输过程中,固定液切勿冷冻结冰。 7、关于细胞爬片的制作和取出,可参考笔记“贴壁细胞固定(微孔板免疫荧光共聚焦)样本制备操作步骤”。 以上以贴壁细胞为例,制备电镜样本。悬浮细胞电镜细胞样本操作步骤如下: a、收集悬浮细胞于5ml离心管,1000转离心5分钟(约肉眼可见细胞沉淀米粒大小)。 2、弃培养基后用37度预热的PBS,轻轻吹打漂洗。 3、弃PBS加电镜固定液,细胞必须吹散悬浮于固定液内。 4、4度保存,4度蓝冰冰袋运输。 |