U87细胞，到底还能用不？

人神经胶质瘤细胞（U-87 MG ）与人胶质瘤细胞（U-251 MG）是人胶质瘤研究常用的细胞系。尤其U-87，在2018年前为首选，很受欢迎。在Cellosaurus细胞库中检索U87细胞，可见有152条相关报道的细胞系或稳定株（敲定和过表达）的收录了记录。

同时，在此数据库中，也明确了U-87MG ATCC (CVCL_0022)是一个有问题的细胞（Problematic cell line），不建议使用。

但在实际研究中，又不得不使用。那么该如何选择与取舍呢？首选，能用U251或者其他细胞系替代，甚好。其次，一定要用U87细胞，可将备选的U87细胞先做STR鉴定。一定确保STR匹配度大于80%以上才能使用（这也是所有细胞使用的原则，需数据库有收录的前提下。）。例如，我们细胞库中保存的其中一株亲本U-87MG细胞。STR鉴定结果显示，其与U-87MG ATCC (CVCL_0022) 匹配度为81.16%；与数据库中收录的U-87MG Luc等细胞96%以上的匹配度。所以，从STR鉴定的结果来看，可以用。但已经报道和明确了，数据库中收录的U-87MG ATCC (CVCL_0022) 细胞是有问题的，所以，此细胞还是不要使用为好。

A、人神经胶质瘤细胞（U-87 MG ）培养条件：89% H-DMEM+10%FBS+1X双抗（可不添加）+5%CO2+37+O2（通气）+95%湿度。         a、H-DMEM培养基：Corning，Cat#10-013-CVRC；

b、FBS（胎牛血清）：CytoBiotech(驷拓柏腾)，Cat#FBS-F-500；

c、双抗：CytoBiotech(驷拓柏腾)，Cat#PS-100X，使用浓度1X；

d、细胞背景脏，有小黑点和支原体污染现象，使用多能高效微生物防治试剂（O-V3-B5-III）：CytoBiotech(驷拓柏腾)，Cat#O-V3-B5-1ml。使用剂量：6ul/ml完培。

B、培养经验与技巧：

a、贴壁生长，24h增殖一代。复苏或传代后2h开始贴壁，24h内舒展开神经细胞的形态。

b、低密度时细胞形态完全舒展，中高密度细胞接触抑制生长，并出现大量球状细胞。

c、冻存时，使用“90% FBS+10% DMSO比例的配方”配置的细胞冻存液，细胞复苏时成活率更高，优于传统的“H-DMEM（或1640）：FBS：DMSO=7:2:1比例的配方” 。d、此细胞易感染，构建敲定或者过表达稳定株时，使用慢病毒（滴度10e8/ml）感染48h可见荧光报告基因表达。目前已经成功构建了GFP绿色-荧光霉素双报告基因标记标记的人神经胶质瘤细胞（U-87 MG-GFP-Luc2）稳定株。腺病毒感染时，也易感染。例如使用细胞自噬mRFP-GFP-LC3腺病毒感染指示细胞自噬流的变化，感染72h后荧光表达明显。C、细胞特征编码：          STR-11983-U-87 MG-H-DMEM-TryEDTA=1min-TransMed=72h-G2=24h   D、人神经胶质瘤细胞（U-87 MG ）照片：             

E、细胞自噬mRFP-GFP-LC3腺病毒感染感染照片：   

总而言之，人神经胶质瘤细胞（U-87 MG ）是一个有争议的细胞，不建议使用。