细胞固定（微孔板免疫荧光共聚焦）样本制备操作步骤

以贴壁细胞96孔板给药的细胞实验为例，其他孔板同理。若为细胞爬片的固定，请参考笔记“免疫荧光电镜细胞爬片（24孔板）制作、固定和取出操作步骤”；若为悬浮细胞固定，私信。

1、超净台内预先准备室温平衡过的4%多聚甲醛和PBS，1ml无菌加长枪头2盒，10ul无菌枪头1盒，1ml移液器1把（批量操作用真空泵），1ml电子分液器1把（也可用排枪或200ul移液器）。

2、细胞给药或造模时间点到，用1ml移液器适配1ml无菌加长枪头，再在1ml无菌加长枪头上（外）套上10ul无菌枪头（小枪头套在大枪头外，见图），从A1空依次吸弃孔内细胞培养基，连续吸取10孔到废液缸。

3、使用电子分液器吸取1ml 4% 多聚甲醛，按照100ul/Well分液到上述操作2中的96孔板单孔内，并开始计时15分钟。

4、反复操作上2和3，止到96所有细胞实验孔均被添加了100ul的4% 多聚甲醛。

5、放置室温15分钟结束（细胞固定），使用上述操作2中的“小枪头套在大枪头外”同样方法批量吸弃96孔板所有实验孔内的固定液（4% 多聚甲醛）到废液缸。

6、使用电子分液器吸取1ml PBS，按照100ul/Well分液到上述操作5中的96孔板单孔内。

7、使用上述操作2中的“小枪头套在大枪头外”同样方法批量吸弃96孔板所有实验孔内的PBS到废液缸。

8、重复6和7操作一次，共清洗2遍。

9、准备开始封闭和破膜的后续免疫荧光实验，或贴上封口膜套保鲜袋或密封带放置4度保存（干孔，不需要添加任何液体）2周内无影响。