细胞给药实验药物配置方法技巧图1和2:药物二级母液配置,图3:细胞给药方案。 案例:药物母液浓度为100mg/ml(溶剂为:DMSO,溶解度为:100mg/ml),需要配置系列浓度梯度给药工作液(每个3个复孔,100ul/Well),工作液浓度分别为100ug/ml、50ug/ml、25ug/ml、12.5ug/ml、6.25ug/ml、3.125ug/ml。给药体系含10% FBS。 A、错误配置方法一演示:直接取浓度为100mg/ml的母液,分别使用含10% FBS的完全培养基1000倍、2000倍稀释。。。配置成上述工作液给药300ul或500ul或1ml。 a、错误配置原因1:这样配置的工作液中DMSO含量逐渐递减,分别为0.1%、0.05%.......,从第二个浓度开始,便有药物析出(你很有可能不会发现不溶解)。 b、错误配置原因2:这样配置的工作液,从第二浓度开始取的母液已经小于1ul(假设后续配置工作液均为1ml,若为配置500ul取样会更小),后续取母液的体积等倍递减,取样不准确,导致药物配置的浓度误差大。 B、错误配置方法二演示:直接取浓度为100mg/ml的药物母液,使用含10% FBS的完全培养基1000倍稀释(990ul完培+1ul 100mg/ml的母液),配置成100ug/ml的最高浓度工作液。其他各个浓度工作液,分别使用上一个浓度工作液倍比稀释。例如取500ul的100ug/ml工作液,添加到500ul完全培养基中,等倍稀释成50ug/ml的工作液。其他各个给药浓度依次类推。 a、错误配置原因:这样配置的工作液,看起来避免了取样(母液)小于1ul的误差大的概率,但等倍稀释的工作液中DMSO含量逐渐递减,分别为0.1%、0.05%.......,从第二个浓度开始,便有药物析出(你很有可能不会发现不溶解)。 C、正确配置方法: a、【配置药物二级母液】配置各个给药浓度工作液1000倍的二级母液:即取适量DMSO溶剂(不是完全培养基),将母液浓度为100mg/ml的药物(一级母液)稀释成工作液1000倍的二级母液。 举例说明:取10ul母液浓度为100mg/ml的药物(一级母液)添加到10ul的DMSO溶剂中,10ul移液器重悬混匀,便可得到50mg/ml的药物(二级母液);取5ul母液浓度为100mg/ml的药物(一级母液)添加到15ul的DMSO溶剂中,10ul移液器重悬混匀,便可得到25mg/ml的药物(二级母液).......其他各个给药浓度的二级母液配置方法依次类推。 b、【配置给药工作液】取各个给药浓度工作液1000倍的二级母液配置给药工作液:即取适量(1ul)的二级母液,添加到适量(999ul)的完全培养基中(不是DMSO溶剂),调整1ml移液器量程到900ul重悬混匀,便可得到1000倍稀释的给药工作液。 举例说明:取1ul的50mg/ml的药物(二级母液),添加到999ul的完全培养基中(不是DMSO溶剂),调整1ml移液器量程到900ul重悬混匀,便可得到50ug/ml的给药工作液。取1ul的25mg/ml的药物(二级母液),添加到999ul的完全培养基中(不是DMSO溶剂),调整1ml移液器量程到900ul重悬混匀,便可得到25ug/ml的给药工作液.......其他各个给药浓度的工作液配置方法依次类推。 c、上述配置的各个浓度给药工作液中含DMSO均为0.1% ,溶解度为100mg/ml,确保其充分溶解,不析出(37度)。但,需要设置0.1% DMSO作为溶剂对照组(配置方法:1ul的DMSO添加到999ul的完培中),扣除DMSO作为溶剂对细胞增殖或其他功能的影响。 D、药物配置方法拓展: a、若溶剂为ddH2O或其他,配置二级母液的方法与【C、正确配置方法:】一致,但需要使用对应的溶剂,并设置同等比例的溶剂对照组(参考0.1% DMSO溶剂对照组)。 b、给药浓度为物质量浓度的给药体系(例如:nM),配置二级母液的方法和工作液方法与上述【C、正确配置方法】一致,只是单位有别。
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研究案例
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