细胞给药实验药物配置方法技巧

图1和2：药物二级母液配置，图3：细胞给药方案。

案例：药物母液浓度为100mg/ml（溶剂为：DMSO，溶解度为：100mg/ml），需要配置系列浓度梯度给药工作液（每个3个复孔，100ul/Well），工作液浓度分别为100ug/ml、50ug/ml、25ug/ml、12.5ug/ml、6.25ug/ml、3.125ug/ml。给药体系含10% FBS。

A、错误配置方法一演示：直接取浓度为100mg/ml的母液，分别使用含10% FBS的完全培养基1000倍、2000倍稀释。。。配置成上述工作液给药300ul或500ul或1ml。

a、错误配置原因1：这样配置的工作液中DMSO含量逐渐递减，分别为0.1%、0.05%.......，从第二个浓度开始，便有药物析出（你很有可能不会发现不溶解）。

b、错误配置原因2：这样配置的工作液，从第二浓度开始取的母液已经小于1ul（假设后续配置工作液均为1ml，若为配置500ul取样会更小），后续取母液的体积等倍递减，取样不准确，导致药物配置的浓度误差大。

B、错误配置方法二演示：直接取浓度为100mg/ml的药物母液，使用含10% FBS的完全培养基1000倍稀释（990ul完培+1ul   100mg/ml的母液），配置成100ug/ml的最高浓度工作液。其他各个浓度工作液，分别使用上一个浓度工作液倍比稀释。例如取500ul的100ug/ml工作液，添加到500ul完全培养基中，等倍稀释成50ug/ml的工作液。其他各个给药浓度依次类推。

a、错误配置原因：这样配置的工作液，看起来避免了取样（母液）小于1ul的误差大的概率，但等倍稀释的工作液中DMSO含量逐渐递减，分别为0.1%、0.05%.......，从第二个浓度开始，便有药物析出（你很有可能不会发现不溶解）。

C、正确配置方法：

a、【配置药物二级母液】配置各个给药浓度工作液1000倍的二级母液：即取适量DMSO溶剂（不是完全培养基），将母液浓度为100mg/ml的药物（一级母液）稀释成工作液1000倍的二级母液。

举例说明：取10ul母液浓度为100mg/ml的药物（一级母液）添加到10ul的DMSO溶剂中，10ul移液器重悬混匀，便可得到50mg/ml的药物（二级母液）；取5ul母液浓度为100mg/ml的药物（一级母液）添加到15ul的DMSO溶剂中，10ul移液器重悬混匀，便可得到25mg/ml的药物（二级母液）.......其他各个给药浓度的二级母液配置方法依次类推。

b、【配置给药工作液】取各个给药浓度工作液1000倍的二级母液配置给药工作液：即取适量（1ul）的二级母液，添加到适量（999ul）的完全培养基中（不是DMSO溶剂），调整1ml移液器量程到900ul重悬混匀，便可得到1000倍稀释的给药工作液。

举例说明：取1ul的50mg/ml的药物（二级母液），添加到999ul的完全培养基中（不是DMSO溶剂），调整1ml移液器量程到900ul重悬混匀，便可得到50ug/ml的给药工作液。取1ul的25mg/ml的药物（二级母液），添加到999ul的完全培养基中（不是DMSO溶剂），调整1ml移液器量程到900ul重悬混匀，便可得到25ug/ml的给药工作液.......其他各个给药浓度的工作液配置方法依次类推。

c、上述配置的各个浓度给药工作液中含DMSO均为0.1% ，溶解度为100mg/ml，确保其充分溶解，不析出（37度）。但，需要设置0.1% DMSO作为溶剂对照组（配置方法：1ul的DMSO添加到999ul的完培中），扣除DMSO作为溶剂对细胞增殖或其他功能的影响。

D、药物配置方法拓展：

a、若溶剂为ddH2O或其他，配置二级母液的方法与【C、正确配置方法：】一致，但需要使用对应的溶剂，并设置同等比例的溶剂对照组（参考0.1% DMSO溶剂对照组）。

b、给药浓度为物质量浓度的给药体系（例如：nM），配置二级母液的方法和工作液方法与上述【C、正确配置方法】一致，只是单位有别。