A2780/DDP顺铂耐药细胞株细胞培养经验和技巧

1、人卵巢癌顺铂耐药细胞株( A2780/DDP )培养条件：84% H-DMEM+15% FBS+1X双抗+5%CO2+O2+37°,DDP=5ug/ml（激活浓度）

2、细胞培养经验和技巧：

a、A2780/DDP细胞抱团生长，会有多边形形态出现，尤其药物激活后，主要表现为多边形形态。

b、A2780/DDP细胞消化传代接种48h后才完全贴壁，所有复苏或传代后48h内不要换液。

c、细胞给药实验，也需接种36h+后，才能换液给药，否则细胞脱落导致细胞基数差异较大

d、营养缺乏或者培养环境不适应时，会有细胞脱落（活细胞）。所以，需要使用优质FBS，48h换液一次。还可适当增加FBS用量到20%和增加换液的频率。

3、A2780/DDP细胞激活方法与操作步骤：

a、细胞贴壁48h，并细胞汇合度大于75%，准备激活。

b、换含DDP为5ug/ml，含15%FBS的H-DMEM完培8ml/T25瓶，培养36h-48h。

c、换含15%FBS的H-DMEM完培8ml/T25瓶，正常培养24h，便可成功激活。2、DDP为5ug/ml的工作液配置方法：

a、需要先用DMSO配置5mg/ml的二级母液；

b、再用完培1000倍稀释成5ug/ml。

4、关于A2780/DDP细胞药物添加（激活）注意事项

a、A2780/DDP细胞正常培养过程中无需添加DDP。

b、A2780/DDP细胞激活后传代次数多余5次，建议实验前再次激活，以确保耐药基因充分表达。

c、A2780/DDP细胞冻存再复苏实验前，建议激活后铺板给药。

d、细胞冻存时，更无需添加DDP。

5、关于DDP顺铂药物的溶解和配置：

a、虽然报道称“DMSO溶解DDP会影响其活性”，但由于DDP在无菌水（溶解度为2mg/ml）或DMF（溶解度为12mg/ml），为了提高溶解度，还需使用DMSO溶解（100mg/ml）配置母液。配置的母液分装避光冻存负20度冰箱，6个月内未见明显的活性降低。

b、不可直接取10mg/ml的或100mg/ml的母液稀释（2000倍或2W倍）到5ug/ml的工作液。

6、A2780/DDP细胞特征编码：STR-11537-A2780/DDP-H-DMEM-15% FBS-AdherentT=（48h+）-TryEDTA=2min-TransMed=48h-G2=24h-DDP=5ug/ml（激活浓度）