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35mm共聚焦皿显微镜成像载物架改良方法技巧与经验

作者：Cell Gao

图1：改良后35mm共聚焦皿显微镜拍照载物状态；

图2：使用改良后35mm共聚焦皿显微镜拍照的照片（10X）；
图3：未改良的显微镜载物台；
图4：改良的能承载35mm共聚焦皿的载物架；
图5：改良的“核心装置”--六边形透明塑料片。

35mm共聚焦皿显微镜成像载物架改良方法技巧与经验:

1、显微镜成像问题：常规显微载物架支持细胞微孔培养基板、100mm皿、60mm皿和T25瓶，但不支持35mm共聚焦皿。若放置35mm共聚焦皿于载物台成像，其会从载物架孔内坠落。
2、改良方法技巧：
a、测试现有显微镜载物台内尺寸（长方形）的长和宽，实际就是一块96孔板的尺寸，显微镜载物台上也有刻度尺寸可估算。
b、找一张透明的硬塑料片。
c、对折透明硬塑料片，找到中心点并标记。
d、穿过中心点，向两侧画长17mm的线段，并标记为AB两点。确保AB线段长度小于34mm（最好大于30mm），穿过中心点。
e、绕着中心点，再对折后剪裁一个六边形（也可剪裁其他形状图像，但需考虑其两端最大跨度距离不超过35mm）。
f、将其放置显微镜载物架测试是否匹配，再进一步加工，直到可适配35mm共聚焦皿为止。
3、共聚焦皿接种和换液经验：
a、商品化外直径为35mm共聚焦皿，内直径有15mm和20mm两种，通常选择内直径为15mm的共聚焦接种细胞，并给药或造模，固定后荧光染色再共聚焦成像。但内直径为15mm的35mm共聚焦皿，在接种细胞单悬液时，只需直接接种到内直径15mm的载玻片上，接种总体积不超过150ul。太少，不能覆盖；太多，会溢出到载玻片外周，导致细胞数目减少。
b、待细胞贴壁过夜后（约12-16h），换液500ul（会溢出到载玻片外，不影响细胞数目和生长）完培或依据实验要求确定换液体积。
c、后续给药或造模，均按照500ul/35mm共聚焦皿的体积来配置和添加。



文章分类： 研究案例
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