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悬浮生长细胞垂直培养经验和技巧

作者：Cell Gao

图1：垂直放置CO2培养箱培养的细胞；

图2：刚刚分别补液（不是换液）细胞；

通常我们的细胞水平放置CO2培养箱培养，为何有一些细胞还需要垂直放置CO2培养箱培养呢。

首先，贴壁生长的细胞，水平放置CO2培养箱培养，庸无质疑。其次，悬浮生长的细胞，通常水平放置CO2培养箱培养，也庸无质疑。但，悬浮生长的细胞不能像贴壁生长的细胞以“吸走上清”的方式换液。所以，悬浮细胞换液也不便捷。其实，最大的问题在：悬浮细胞水平培养时，培养基的体积和生长空间受到了限制，故针将悬浮生长的细胞培养方式，改良成垂直放置CO2培养箱培养。方便后续描述，简称为“垂直培养”。

悬浮生长的细胞垂直培养，1个T25瓶连续补液到70ml，可获得水平方式下5个100皿的细胞量，相当于10个T25瓶水平培养的细胞，甚至更多。悬浮细胞垂直培养时，有哪些细节需要注意，又该如何操作呢：

1、悬浮生长的细胞可通过补液后垂直放置CO2培养箱培养，达到“换液”增加营养，稀释代谢物的目的。

2、悬浮生长的细胞培养基略黄，就需补液，通常24-48h补液一次。水平放置时细胞汇合度大于50%，补液完培的总体积为原T25瓶内总体积的1-1.5倍（或者等体积补液）。培养体系总体积大于15ml时，把透气的T25瓶立起来（垂直放置，瓶盖朝上），止到培养基大于50ml或后续实验时，再吸出细胞悬液冻存、传代或换液。

3、悬浮生长的细胞，在进行细胞传代或换液时，不能直接换液。可直接分液方式分瓶或传代；也可吸出细胞悬液于无菌离心管，1200转离心5分钟去掉上清收集细胞沉淀，再进行传代或换液（实际上为补液重悬再接种，与细胞冻存操作相近，但前者用完培重悬细胞沉淀，后者用冻存液重悬细胞沉淀。）。

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文章分类：细胞培养技巧与经验

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