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人脐静脉内皮细胞-SV40T转化(HUVEC-T1)培养技巧和经验

作者:Cell Gao




1、人脐静脉内皮细胞-SV40T转化(HUVEC-T1)培养条件:ECM条件培养基,配方:46.5ml ECM基础培养基+2.5ml FBS+500ul ECGS+500ul 双抗

2、培养经验:必须使用ECM条件培养基,含ECGS因子。轻柔操作,尽可能不离心,减少损失。使用“润湿消化法”消化传代细胞,不需要离心。操作步骤如下:

a、吸弃或倒掉培养瓶内所有培养基。
b、预热的PBS清洗两遍,分别4ml和3ml。
c、吸取500ul含EDTA的胰酶滴加入T25瓶内,轻轻水平晃动。
d、待胰酶均匀润湿细胞表面后,计时10秒。吸出所有的胰酶,盖上盖。
e、将T25瓶水平放置37度培养箱,孵育消化细胞2分钟。
f、无菌环境,向T25瓶内添加3ml完培(或专培,依据细胞培养条件而定。本操作视频以Huvec消化为例,使用的是ECM条件培养基终止消化。),轻轻吹打,混匀,便实现终止消化。
g、取1.5ml单悬液1000转离心5分钟,弃掉上清使用700ul冻存重悬后冻存
h、剩余的1.5ml单悬液,不用离心直接接种2个T25瓶,分别补液到6ml/T25 ECM专培(或者完培,依据细胞培养条件而定)。
i、传代培养24h或48h后,换液6ml/T25瓶预热的完培或专培(依据细胞贴壁的时间来定,例如:A2780/DDP、MCF-7、HepG2及HepG2215细胞接种后48h才能完全贴壁,48h换液)。
备注:使用“润湿消化法”消化传代细胞,T25瓶内残留的低于50ul的胰酶,不会影响细胞的生长增殖,已经反复验证。

3、细胞特征编码:STR-12008-Huvec-T1-ECM-TryEDTA=30S-TransMed=48h(50%+,24h)-G=48h -AdherentT=12h。


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