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支原体污染治疗方法和技巧

作者：Cell Gao

图1：SNU-449细胞支原体污染照片（100倍）；

图2：使用（O-V3-B5）治疗后细胞照片（100倍）；

图3：细胞支原体污染治疗前后PCR检测数据；

图4：细胞支原体污染治疗前后PCR电泳检测结果。

第一、支原体污染治疗方法和技巧：

1、【活污染物清洗】弃掉培养基，分别5ml、4ml和3ml预热的PBS或完培（T25瓶剂量），清洗细胞3遍。

2、【污染物超高剂量消杀】T25瓶换液2ml的预热的完全培养基后，添加25ul多能高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5）到T25瓶内。轻轻摇匀，再培养箱水平培养30min。

3、【死亡的污染物清洗】30min后，弃掉完全培养基，按照4ml（预热的PBS或完培）/T25瓶的剂量，清洗细胞3遍。

4、【污染物高剂量持续消杀】换液5ml预热的完培后，按照50ul（O-V3-B5）/T25瓶/5ml完全培养基的剂量，添加多能高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5）到T25瓶内，再培养箱水平培养24h。

5、【消杀后观察成像】消杀24小时后，显微观察并拍照。

6、【连续高剂量消杀】按照1-5步骤每48小时换液治疗一次，连续治疗8天。

7、【中剂量巩固治疗】治疗Day8后，换预热的完培后，再按照6ul（O-V3-B5）/ml完全培养基剂量，添加高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5）到预热的完培中，换液。并持续4天。

8、【支原体检测】取细胞样本“PCR法”检测支原体，或取细胞培养液“水煮法”检测支原体。

第二、支原体污染预防方法：

常规细胞培养时，按照3ul至6ul（O-V3-B5）/ml完全培养基剂量，添加高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5）到预热的完培中，换液培养，便可预防常见的“支原体污染”污染。

备注：

1、完培是否含双抗，均不影响多能高效细胞微生物防治试剂（O-V3-B5）治疗或预防支原体污染。通过超高剂量消杀、高剂量消杀和中剂量巩固治疗，12天内可彻底清除支原体污染。

2、支原体污染通常细胞形态或背景没有明显的变化，故不能通过形态判断是否支原体污染，而是需通过PCR或水煮法检测。
3、此方法仅适合细胞体外培养实验所遇到的支原体污染预防和治疗，不能用于临床、人体或食品添加等领域或行业。

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