【细胞增殖检测】方法介绍---基于实时动态活细胞成像（InCuCyte）平台

1、“润湿消化法”消化细胞，不用离心去除胰酶，稀释后直接使用。

a、“润湿消化法”消化细胞详细操作步骤，请本公众号搜索【“润湿消化法”消化传代细胞操作步骤】获得。此处，略。
或复制网页查阅https://mp.weixin.qq.com/s/mAOPhAS_S2yf8mQg3lcuzw。

b、“润湿消化法”操作过程视频：https://mp.weixin.qq.com/s/60f5Ytmc9bpnf9Re_pDIpQ

2、细胞计数。
细胞计数详细操作步骤，请本公众号搜索【如何实现细胞精准计数】获得。此处，略。或复制网页查阅https://mp.weixin.qq.com/s/2a2itnAKqFCBXhUVlwEuew。

3、细胞铺板和细胞给药后分别整板成像，作为给药前后0h的细胞增殖的基数。

A、细胞铺板后0h细胞增殖检测：

细胞铺板后，细胞培养板超净台内水平放置3分钟，再将96孔板水平放入实时动态活细胞成像活细胞（InCucyte）系统，设置明场（也可荧光）20X或10X成像，每孔成像4个视野。数据分析后，作为细胞接种0h的细胞增殖基数。

96孔细胞培养板铺板详细操作过程视频，请本公众号搜索【96孔板铺板操作过程视频】获得。此处，略。
或复制网页查阅https://mp.weixin.qq.com/s/uHUGoMRG_jDP6LcBK8-o7A。

B、细胞给药后0h细胞增殖检测：
细胞给药前也可整板成像检测一次，以便确认给药过程是否有细胞脱落或其他现象。至少挑选3孔以上，显微镜下观察，确保细胞无污染、形态舒展、状态良好，再给药。

细胞给药后，将96孔细胞培养板，37度培养箱水平放置5-10分钟。再将96孔细胞板放入实时动态活细胞成像活细胞（InCucyte）系统。设置明场（也可荧光）20X或10X成像，每孔成像4个视野。数据分析后，作为细胞给药0h的细胞增殖基数。
细胞给药配置和操作方法，请本公众号搜索【细胞实验药物配置方法】获得。此处，略。https://mp.weixin.qq.com/s/MIBw24tRZMVD_1-ah0fmTg。

C、细胞给药后连续时间点细胞增殖检测：

由于实时动态活细胞成像活细胞（InCucyte）系统镶嵌在CO2培养箱中，温度、湿度、O2和CO2浓度均与CO2培养箱一致。所以，细胞给药成像0h操作结束后，可不取出细胞培养板。设置时间轴，可每1h或2h或6h或12h或24h自动检测细胞增殖一次，并数据归集于同一个数据库。也可取出细胞培养板，每12h或24h放入成像一次。连续监测72h，甚至更长时间。

4、细胞增殖检测数据分析和导出。
动态监测72h实验结束后，通过InCuCyte系统自带软件分析统计细胞增殖（细胞死亡和细胞凋亡）的数目、细胞团数目、细胞汇合度、细胞面积，并绘制细胞生长增殖曲线（细胞死亡/毒性/杀伤/凋亡曲线），导出时间间隔照片和细胞增殖过程视频。

A、细胞增殖数据导出：

B、活细胞动态计数增殖数据导出：

C、细胞生长增殖曲线生成：

D、细胞增殖时间间隔照片：

E、细胞增殖过程视频：

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