心肌细胞会不会跳动？

科研常用的永生化的人、小鼠和大鼠心肌细胞系分别为：AC16（人心肌细胞)、HL-1(小鼠心肌细胞)和H9C2(大鼠心肌细胞)。其在体外高糖H-DMEM（含糖4.5g/L，或25mm）环境下均能很好地生长。在低糖、高糖（100mM）或缺氧环境下，其生长会受到抑制。但，不管在那种环境下，这3种永生化的细胞系，体外培养均不会看到心肌细胞跳动的现象。这有别于我们原代分离的心肌细胞。

A、心肌细胞培养条件均为：89% H-DMEM+10%FBS+1X双抗（可不添加）+5%CO2+37+O2（通气）+95%湿度。         a、H-DMEM培养基：Corning，Cat#10-013-CVRC；

b、FBS（胎牛血清）：CytoBiotech(驷拓柏腾)，Cat#FBS-F-500；

c、双抗：CytoBiotech(驷拓柏腾)，Cat#PS-100X，使用浓度1X；

d、细胞背景脏，有小黑点和支原体污染现象，使用多能高效微生物防治试剂（O-V3-B5-III）：CytoBiotech(驷拓柏腾)，Cat#O-V3-B5-1ml。使用剂量：6ul/ml完培。

B、培养经验与技巧：

a、贴壁生长，24h增殖一代。复苏或传代后2h左右开始贴壁，24h内舒展开神经细胞的形态。均可48-72h，甚至更长时间换液一次。

b、低密度时，细胞形态完全开，呈现铺路石、纺锤形、梭型不等；中高密度细胞时，细胞形态会成梭型，但有别与成纤维细胞（FB）。

c、细胞消化时，使用“润湿消化法”，可不用离心，减少胰酶残留和剪切力对细胞的影响。冻存时，使用“90% FBS+10% DMSO比例的配方”配置的细胞冻存液，细胞复苏时成活率更高，优于传统的“H-DMEM（或1640）：FBS：DMSO=7:2:1比例的配方” 。d、人小鼠和大鼠的心肌细胞均易感染。构建敲低或者过表达稳定株时，使用慢病毒（滴度10e8/ml）感染48h可见荧光报告基因表达。目前已经成功构建了mkate2红色荧光标记细胞核的心肌细胞稳定株，可用于动态监测细胞增殖、凋亡和厌氧环境下的再生或自我修复相关研究。腺病毒感染时，也易感染。例如使用细胞自噬mRFP-GFP-LC3腺病毒感染指示细胞自噬流的变化，感染24h后荧光开始表达，72h后荧光最明亮。C、细胞特征编码：          a、人心肌细胞（AC16)：STR-11985-AC16-H-DMEM-10%FBS-TryEDTA=30S-TranSM=72h-DT=24h-Wash=1；

b、小鼠心肌细胞(HL-1)：12630-HL-1-H-DMEM-TryEDTA=2min-TransMed=72h-G2-24hc、大鼠心肌细胞(H9C2)：S-10392-H9C2-H-DMEM-TryEDTA=2min-TransMed=72h-DT=24h

D、心肌细胞照片（先后分别为人、小鼠和大鼠心肌细胞）：          

         E、细胞生长增殖曲线（先后分别小鼠和大鼠心肌细胞）：

F、细胞自噬mRFP-GFP-LC3腺病毒感染感染照片（大鼠心肌细胞）：   

目前，是否有永生化的心肌细胞，体外培养时能看到心肌细胞跳动呢？欢迎在评论区留言。