CT26-Luc（荧光霉素标记的小鼠结肠癌细胞 ）200倍照片

🧬 一、 细胞背景与来源：它的“身世之谜”

• 细胞全称：CT26.WT（CT26 Wild Type，CT26野生型）

• 生物学分类：小鼠结肠癌细胞系（Murine Colon Carcinoma Cell Line）

• 细胞起源：该细胞系由美国国立癌症研究所（NCI）的科学家通过建立BALB/c小鼠的结肠腺癌模型而获得。需要注意的是，CT26实际上是亲本细胞系 NCI-H23 的一个具有高转移性（Highly metastatic）的克隆亚群。

• 核心特征：

• 高度致瘤性：将极少量的CT26.WT细胞皮下注射到同源的BALB/c小鼠体内，就能高效、快速地长出肿瘤。

• 免疫原性强：它能够有效刺激小鼠的免疫系统，引发强烈的抗肿瘤免疫反应，这使其成为研究肿瘤-免疫相互作用的绝佳模型。

  

  CT26-Luc（荧光霉素标记的小鼠结肠癌细胞 ）细胞生长增殖曲线

🔬 二、 核心研究价值与应用场景

CT26.WT之所以在基础研究和新药筛选中备受青睐，主要归功于它在以下几个领域的卓越表现：

1. 肿瘤免疫学与免疫治疗研究的“金标准”

这是CT26.WT最核心、最广泛的应用领域。由于其具有明确的免疫原性，它常被用来构建免疫健全的同源小鼠肿瘤模型（Syngeneic Model）。

• 免疫检查点抑制剂（ICI）评价：它是评估PD-1/PD-L1抗体、CTLA-4抗体等药物疗效的常用模型。研究者可以通过观察药物处理后，小鼠肿瘤微环境（TME）中T细胞、巨噬细胞等免疫细胞的浸润变化，来评估药物的免疫激活能力。

• CAR-T/NK 细胞疗法验证：用于测试新型工程化免疫细胞在体内外对实体瘤的杀伤效果。

2. 肿瘤微环境（TME）与转移机制研究

CT26.WT在小鼠体内不仅生长迅速，还具有一定的转移潜能（特别是向肺部转移）。研究人员常利用它来探索：

• 肿瘤细胞是如何通过分泌细胞因子“策反”周围正常细胞和免疫细胞的。

• 肿瘤血管生成的具体分子机制。

• 肿瘤细胞发生上皮-间质转化（EMT）进而发生侵袭和转移的底层逻辑。

3. 抗癌新药筛选与药效学评价

在药物研发的早中期阶段，CT26.WT因其成瘤周期短（通常接种后3-7天即可成瘤）、成功率极高，被各大药企和CRO公司广泛用于大规模的抗癌化合物筛选。相比于人类肿瘤异种移植模型（CDX/PDX），它成本更低、实验周期更短。

💡 延伸应用：CT26荧光/稳转株的构建

为了更直观地追踪肿瘤的发展，科研人员经常利用CT26.WT制备各种稳转株或荧光标记株，例如：

• CT26-Luc（荧光素酶标记）：用于小动物活体成像系统（IVIS）实时监测肿瘤的生长、消退以及对药物的响应。

• CT26-GFP/RFP（荧光蛋白标记）：用于在细胞水平或切片水平直观观察肿瘤细胞与免疫细胞的共定位，或者细胞杀伤实验等（例如：Cell Gao独创的mkate2细胞核红色荧光标记法）。

💡 总结：CT26.WT不仅是一棵好养活的“摇钱树”，而且是连接基础细胞生物学与复杂体内免疫系统的“桥梁”。熟练掌握它的习性，将为您的肿瘤学研究打下坚实的基础！

CT26-Luc（荧光霉素标记的小鼠结肠癌细胞 ）100倍照片

🧪 三、 基础培养条件（贴壁生长）

• 完全培养基：RPMI-1640 + 10% 优质胎牛血清 (FBS) + 1% 青霉素/链霉素 (P/S)。

• 培养环境：37℃、5% CO2、95% 空气，饱和湿度。

• 细胞形态：贴壁生长，呈典型的成纤维细胞样（梭形或多角形）。

• 换液频率：由于CT26.WT生长速度较快（倍增时间约12-24小时），代谢旺盛，建议每 2-3天 更换一次新鲜培养基。

💡 核心试剂推荐（打造细胞豪华套房）

• 🧪 RPMI-1640：建议选择含谷氨酰胺、高糖（11.1mM）的配方（如 Corning #10-040-CVRC），为细胞提供充足的能量底物。

• FBS（胎牛血清）：细胞的“粮食”。强烈建议使用高品质血清（如 CytoBiotech Cat#FBS-F-500），能有效杜绝空泡现象，提升细胞活力。

• 🧼 消化液：0.25% Trypsin-0.53mM EDTA。CT26.WT对胰酶高度敏感，消化时需采用“润湿法”（见下文），通常 仅需 1分钟左右。

  

  CT26.WT（亲本小鼠结肠癌细胞 ）100倍照片

📊 四、 细胞特征代码与含义（实验室黑话指南）

为了方便记忆和交接，您可以记住这组专属代码：STR-11303-CT26.WT-1640-TryEDTA=1min-TransMed=48h*1.5T-G2=12-24h-AdherentT=2h-Puro=1ug/ml

• TryEDTA：细胞消化条件和时间（仅需 1分钟 左右，对胰酶高度敏感，需采用润湿法）。

• TransMed：换液周期（通常 48小时 换一次液，生长速度快时可缩短至24小时，还要倍增换液的体积）。

• DT (G2)：细胞倍增周期（约 12h--24小时，增殖速度中等偏快）。

• AdherentT：细胞贴壁时间（约 2小时，复苏或传代后初期严禁频繁晃动）。

🛠️ 五、 细胞特点与培养技巧（实战避坑指南）

CT26.WT虽然“好养活”，但由于其贴壁能力较弱、消化时容易成团，常常让不少实验新手感到头疼。掌握以下核心命脉，轻松拿捏它的脾气：

1. 复苏：争分夺秒，去除DMSO

• 快速解冻：从液氮或-80℃取出后，立即投入37℃水浴锅，轻轻摇晃使其在 1-2分钟内 迅速融化。

• 去除保护剂：DMSO对细胞有毒，解冻后应尽快去除。建议将冻存管放入离心机配平（无需加入适量预热的新鲜培养基），1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清后再用新完全培养基重悬接种。

• 静置修复：接种后轻轻混匀，放入培养箱。复苏后24小时内尽量不要晃动培养瓶，让细胞安心贴壁恢复。

2. 传代：掌控消化时间是成败的关键！

CT26.WT贴壁并不牢固，消化时间与常规细胞（如Hela、293T）相近。

• 最佳时机：细胞融合度达到 80%-90% 时进行传代，切勿让其过度长满（超过90%容易引发细胞堆叠和脱落）。

• 推荐比例：1:2 至 1:4（根据实验需求调整）。

• 独家秘籍：润湿法消化（Wetting Method）

1. 预热润洗：吸弃旧液，用 37℃预热 的PBS轻柔润洗1-2遍（冷PBS会导致细胞收缩脱落）。

2. 润湿瓶底：加入500μl胰酶，晃动使瓶底均匀湿润。10秒后吸出450μl，瓶内仅留薄薄一层（约50μl）覆盖细胞。

3. 精准计时：37℃孵育 1-2分钟。镜下见细胞边缘卷起、间隙变大即止（切忌等到细胞变圆脱落，那样损伤太大）。

4. 温柔终止：直接加入3ml预热培养基。用移液器轻柔吹打5-10次。可取1.5ml细胞单悬液接种新的瓶皿（无需离心），补完培正常培养；1/2细胞单悬液，1000 rpm 离心 5 分钟，弃上清后再用1.5ml预冷的冻存液重悬，按照750ul/管分装到1.8ml冻存管内冻存。

3. 冻存：留得青山在

• 配方：90% 完全培养基 + 10% DMSO（或 70% 1640 + 20% FBS + 10% DMSO）。

• 程序：程序性冻存盒 -80℃过夜，次日入液氮。

• 铁律：一管只复苏一次，反复冻融是大忌。

🚨 六、 避坑指南（常见问题与对策）

📜 七、 总结操作口诀

“1640配血清，优质批次定江山；

消化牢记润湿法，一分半钟见好就收莫纠缠；

试剂切记要预热，换液轻柔莫直灌；

传代需待八九成，状态年轻跑得快，科研数据稳如山！”

💡 终极建议：培养CT26.WT就像照顾宠物，最重要的是保持操作的一致性（固定的试剂品牌、固定的消化时间、稳定的环境），不要频繁更换培养条件。希望这份攻略能助您的实验一帆风顺！