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人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)在高糖(含糖25mM或4.5g/L)环境下也能生长,但其在1640培养体系下,细胞增殖更快,细胞形态和活力更好。

人成纤维细胞(FB)培养条件:89% H-DMEM+10%FBS+1X双抗+5%CO;人成纤维细胞(FB)汇合度大于95%以上,才表现出明显的纤维状。

人肾小管细胞(HK-2)培养条件和材料:培养条件:89% F12/DMEM+10ûS,人肾小管细胞(HK-2)比LX-2细胞好养多,更“皮实”。但还是需要注意操作细节。例如,换液前,一定预热;消化细胞时,不拍打瓶皿等。

取10ul单细胞悬液(母液),加入预先添加有990ul的完全培养基的1.5ml EP管内,吹打均匀,制备细胞计数用的单细胞工作液。

生物安全柜内,绝对不能用酒精灯。绝对不能用,就是不能用。

人肝癌细胞(Hep G2)细胞抱团生长,接种后48h才能完全贴壁,所以复苏贴壁过夜后,不能马上换液。接种96孔细胞给药实验,贴壁过夜后,不能给药。

人肝癌细胞(Hep-G2/2.2.15)携带HBV基因,常规无菌环境操作,其不会对人或环境产生污染或感染。但使用时需做好防护。

小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10)在H-DMEM培养体系下培养,细胞汇合度大于80%以上,会出现大量的黑色素斑点现象;100%以上,出现大量黑色素斑块积累现象。

人黑色素瘤细胞(A375)在H-DMEM培养体系下,细胞汇合度大于95%以上,未发现明显的黑色素积累现象。尝试使用1640培养体系,细胞增殖放缓;并高细胞密度,也未见黑色素积累现象。

离心机配平原则离心管以离心机的中心轴(中间的转子轴)呈现轴对称(中心对称)从中间往两边均匀放置,等体积(低密度)或质量配置。

3种冻存盒冻存的细胞复苏后,成活率均没有明显差异。三种冻存盒可相互替代,或同步使用。

细胞实验室最大的污染源,是水浴锅!!!

细胞冻存管管口不需要缠封口膜。

悬浮细胞通常不使用T25瓶运输,而使用15ml离心管运输,更方便细胞富集,扩增,减少细胞丢失,减少离心对细胞的。

人淋巴管内皮细胞(LEC,Human lymphatic endothelial cells)贴壁生长,必须ECM条件培养基培养。

常规细胞培养时,添加双抗不可预防和治疗“真菌”的污染。真菌”以孢子传播,培养箱中若有霉菌菌落、白丝状菌落,一定润湿的纸擦拭包裹丢弃。避免孢子散落,二次污染。

“动杆菌”污染的判断动杆菌污染非常容易分辨。污染12h以上,培养基变浑浊,有沙粒状。添加双抗可预防“动杆菌”。按照1ml完培内含1.5ul的多能高效细胞微生物防治试剂(O-V3-B5,预防剂量为1.5ul/ml),可预防“  动杆菌”。

T淋巴细胞(Jurkat) 悬浮生长,24h增殖一代。48h补液一次,培养体总体积大于15ml时,把T25瓶立起来(垂直放置,瓶盖朝上),止到培养基大于50ml或后续实验时。

人脐静脉内皮细胞-SV40T转化必须使用ECM条件培养基,含ECGS因子。使用“润湿消化法”消化传代细胞,不需要离心。

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