人黑色素瘤细胞(A375)在H-DMEM培养体系下,细胞汇合度大于95%以上,未发现明显的黑色素积累现象。尝试使用1640培养体系,细胞增殖放缓;并高细胞密度,也未见黑色素积累现象。
离心机配平原则离心管以离心机的中心轴(中间的转子轴)呈现轴对称(中心对称)从中间往两边均匀放置,等体积(低密度)或质量配置。
3种冻存盒冻存的细胞复苏后,成活率均没有明显差异。三种冻存盒可相互替代,或同步使用。
细胞实验室最大的污染源,是水浴锅!!!
细胞冻存管管口不需要缠封口膜。
悬浮细胞通常不使用T25瓶运输,而使用15ml离心管运输,更方便细胞富集,扩增,减少细胞丢失,减少离心对细胞的。
人淋巴管内皮细胞(LEC,Human lymphatic endothelial cells)贴壁生长,必须ECM条件培养基培养。
常规细胞培养时,添加双抗不可预防和治疗“真菌”的污染。真菌”以孢子传播,培养箱中若有霉菌菌落、白丝状菌落,一定润湿的纸擦拭包裹丢弃。避免孢子散落,二次污染。
“动杆菌”污染的判断动杆菌污染非常容易分辨。污染12h以上,培养基变浑浊,有沙粒状。添加双抗可预防“动杆菌”。按照1ml完培内含1.5ul的多能高效细胞微生物防治试剂(O-V3-B5,预防剂量为1.5ul/ml),可预防“ 动杆菌”。
T淋巴细胞(Jurkat) 悬浮生长,24h增殖一代。48h补液一次,培养体总体积大于15ml时,把T25瓶立起来(垂直放置,瓶盖朝上),止到培养基大于50ml或后续实验时。
人脐静脉内皮细胞-SV40T转化必须使用ECM条件培养基,含ECGS因子。使用“润湿消化法”消化传代细胞,不需要离心。
“润湿消化法”消化传代细胞操作步骤文字版
悬浮生长的细胞可通过补液后垂直放置CO2培养箱培养,达到“换液”增加营养,稀释代谢物的目的。
人慢性B淋巴细胞白血病(MEC-1)悬浮单层生长,高密度时聚集一起,具有伞状或岛状,但不影响细胞成活率和增殖。可通过半换液或补液实现营养的补给或代谢物排放(稀释)。
人原位胰腺腺癌细胞(BxPC-3)复苏或传代接种后24贴壁,生长48h后才具有明显的抱团生长形态。
GT1-7对温度相对敏感,若室温很低(特别是冬天),请尽量缩短显微镜观察时间,否则细胞脱落。
A2780/DDP细胞消化传代接种48h后才完全贴壁,所有复苏或传代后48h内不要换液。细胞给药实验前需要使用DDP激活,正常培养过程中无需添加DDP。
A549/DDP顺铂耐药细胞株给药实验前,需要使用含DDP浓度为6.6657uM的完培激活24h-48h,确保耐药基因表达。
已经到底了~