西安赛拓博泰生物科技有限公司

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多能高效转染剂(TransVB-Hi)

品牌: CytoBiotech(驷拓柏腾)
货号: TransVB-50ul
规格: 50ul/管
应用: 适合转染siRNA、质粒、共转染;慢病毒包装(配合293TLX细胞,出毒率更高);转染昆虫细胞。
保存条件: 4度避光和空气,两年内稳定
运输条件: 4度
价格: 询价
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多能高效转染剂(TransVB-Hi)说明书

名称】多能高效转染剂(TransVB-Hi)

货号】TransVB-1ml或TransVB-500ul或TransVB-50ul

规格】1ml/管或500ul/管或50ul/管

工作浓度】推荐:9ul /6孔板单孔(无血清体系转染)

运输和贮藏】常温运输或蓝冰运输,4℃避光储存

生产日期】见外包装批次(Lot#)

有效期】3年

生产企业】西安赛拓博泰生物科技有限公司

组分和原理】“多能高效转染剂(TransVB-Hi)”,由PEI、HCI等一系列生物制剂配伍而成的科学研究用的多能高效转染剂。其转染原理为:多能高效转染剂(TransVB-Hi)改善细胞PH值微环境,促进细胞贴壁,增加细胞膜通透性,促使细胞膜形成更多的“分子筛网”。在体外环境,多能高效转染剂(TransVB-Hi)组分中带正电的阳离子聚合物与目的分子(质粒、基因或大分子或小分子)中带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后,再与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用,或直接穿过细胞膜的分子筛网和通过细胞胞吞方式进入细胞,从而非整合或整合到宿主细胞基因组,实现瞬转或长效表达。

应用】主要验证可用于质粒、大分子材料和小分子材料转染或共转染哺乳动物(人、小鼠、大鼠)贴壁细胞、悬浮细胞和昆虫细胞,将目的基因非整合或整合到宿主细胞基因组,实现瞬转或长效表达。
【产品特点】

1.本品对人和环境安全无害。无微生物传染性污染,无气味污染,无颜色,无光污染。

2.多能:可转染多种哺乳动物贴壁细胞、悬浮细胞和昆虫细胞。

3.高效:转染效率高、表达快。例如:CRISPR-GFP-Luc转染2h后荧光开始表达,转染8h后转染效率为同类转染试剂4倍以上)。

4.低细胞毒性:转染细胞6h-24h换液,对细胞形态影响很小,细胞无明显毒副作用。

5.稳定:转染效率稳定、已经建立标准化可重复操作,可用于大规模的转染、病毒包装和工业化应用。

6.适合大规模病毒包装和生产,尤其配合293TLX细胞(货号:11555-11041-293TLX ),病毒滴度高(出毒率高,相当同等条件下于6X的293FT,30X的293)。


已验证可转染细胞

哺乳动物贴壁细胞

aa、人源细胞:293T、293TLX、HK-2、LX-2、A549、Hela、人胃粘膜细胞(GES-1)、人脐静脉融合细胞(EAhy926)、人脐静脉内皮细胞-SV40T转化(HUVEC-T1)、人脂肪干细胞(H-ADMSC)、人脐带间充质干细胞(H-MSC)、人牙周膜干细胞(hPDLSC )、人正常甲状腺滤泡上皮细胞(Nthy-ori 3-1)、人肝癌细胞(SNU-449)、人B淋巴白血病细胞(NALM6)人卵巢癌细胞( A2780 )、 人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)、人结肠腺癌细胞(SW1116)、人非小细胞肺癌细胞[NCI-H1650]、人肝癌细胞(HepG2215)等。
bb、小鼠源细胞:小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)、小鼠胚胎成纤维细胞(3T3-L1)、小鼠小胶质细胞(BV2细胞)、小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)、小鼠结肠癌细胞( CT26.WT)、小鼠海马神经元细胞系(HT-22细胞系)、小鼠胰岛 β 细胞(MIN6)、小鼠肺腺癌细胞(CMT167)、小鼠视网膜神经节细胞(661W)、小鼠骨髓间充质干细胞(MBMSC-C57BL/6)、小鼠脂肪间充质干细胞(MADMSC-C57BL/6-P6)。
cc、大鼠原细胞:大鼠心肌细胞(H9C2)、大鼠肠上皮细胞(IEC-6)细胞、大鼠胸大动脉平滑肌细胞(A7R5)、大鼠肝癌细胞 (H4-II-E-C3(RH-35))、大鼠骨髓间充质干细胞(R-BMSC)。

哺乳动物悬浮细胞NK92、NK92/MI、K562、人T淋巴瘤细胞(SUP-T1)、人Ph+急淋白血病细胞系(SUP-B15)等。

C、昆虫细胞昆虫细胞(SF-9-III-SFM)、昆虫细胞(SF-9)。

                                 应用操作介绍
第一、TransVB-Hi转染试剂转染6孔板贴壁哺乳动物细胞(慢病毒包装)操作说明
本操作以6孔板单孔细胞三代慢病毒包装转染操作步骤为例:
目的细胞:293TLX,目的质粒:SC-mKate2-Puro-Vector质粒,辅助质粒:PLP1质粒、PLP2 质粒   、PVSV-G质粒

基础条件:转染时293TLX细胞融合度达到80%;各种质粒(包括辅助质粒)浓度大于800ng/ul。

1、准备2个无菌的0.6ml EP管,分别标记A 管和B-TransV管。

2、准备转染试剂(TransVB-Hi转染试剂)、 H-DMEM基础培养基(不含FBS)、无双抗 H-DMEM完全培养基(含FBS=5%,含糖25mM)、目的质粒(SC-mKate2-Puro-Vector),病毒包装辅助三质粒(PLP1质粒、PLP2 质粒   、PVSV-G质粒),酒精喷洒外包装消毒。

3、制备Trans-VB-Vector 复合物:

a、转染时,细胞融合度需达到80%最合适。

b、在转染前30分钟,换新鲜的不含抗生素的完全培养液900ul/孔(含FBS 5% ,血清不影响转染效率)。

c、向标记的A 管和B-TransV管内,分别加入 100ul H-DMEM基础培养基。盖上盖,贴封口膜。

d、质粒稀释:取3ug目的质粒(SC-mKate2-Puro-Vector),3种辅助质粒各1ug,按照目的质粒、PLP1质粒、PLP2 质粒   、PVSV-G质粒的先后顺序加入到含100ul H-DMEM基础培养基的 A 管中;轻轻吹打混匀(8-10次),贴封口膜,放置超净台(室温)静止5分钟,形成“A-Vector 复合物”。

e、转染试剂TransVB-Hi稀释:把8ul的“TransVB-Hi细胞转染试剂”加入到含100ul H-DMEM基础培养基的B-TransV管,轻轻混匀(吹打8-10次)。

f、将稀释后的转染试剂TransVB-Hi(B-TransV管)加入稀释的质粒A管中(切记此混合的顺序不能反向进行),轻轻混匀(不能震荡或旋涡,吹打3-5次),盖上盖,贴封口膜。放超净台(室温)放置 15 min,形成Trans-VB-Vector 复合物。

4、转染:

a、将上述A管中大约220ul Trans-VB-Vector 复合物均匀(200ul枪头+10ul枪头)滴加入6孔板内的细胞培养液中。切记:每次在孔内的不同位置,缓慢滴加一滴)。滴加完后,十字方向,水平轻轻晃动培养板(约2-4次)。

b、放入培养箱( 37℃,5% CO2)正常培养,或放入实时动态活细胞成像系统 ,设置明场和红光拍照,动态监测转染效率。

c、转染监测培养6h后,目的细胞开始表达mkate2红色荧光;转染18h小时,荧光数目表达量达到最大。

d、转染后 10-16h时,按照3.5ml /6孔板单孔,换液H-DMEM完全培养基(含10%FBS,含糖25mM,不含双抗)扩增48h病毒。

5、病毒扩增和收集:

a、转染换液后,扩增病毒32h(共计转染48h)后收集48h病毒上清。将48h病毒上清2000转,离心10分钟。取上清,按照500ul/管分装,保存-80冰箱;或直接感染293TLX细胞(1:1,含PolyBrence=2ug/ml)或者目的细胞(U251、HK-2\A549细胞),测试感染效率。病毒滴度适中情况下,24h开始用红色荧光表达。

b、按照2.5ml /6孔板单孔,换液完全培养基(含10%FBS,不含双抗),正常培养24h扩增72h病毒;

e、收集72h病毒上清(原孔消毒和无公害处理后丢弃),将72h病毒上清2000转,离心10分钟。取上清,按照500ul/管分装,保存-80冰箱;或直接感染293TLX细胞(1:1)或者目的细胞,测试感染效率。也可使用PGE8000纯化病毒,提高滴度。

5、注意事项:

a、TransVB-Hi转染试剂不能长时间放置空气中,需要避光保存和操作。

b、慢病毒包装,需要注意生物安全和防护。

c、此试剂材料,仅限科研研究,不能用于临床或人体实验。

d、也可使用PGE8000纯化病毒,提高慢病毒的滴度。

第二、TransVB-Hi转染试剂转染6孔板贴壁哺乳动物细胞(质粒转染)操作说明
本操作以6孔板单孔细胞转染质粒操作步骤为例:
目的细胞:293TLX,目的质粒:SC-mKate2-Puro-Vector质粒。

基础条件:转染时293TLX细胞融合度达到:80%;质粒浓度大于800ng/ul。

1、准备耗材2个无菌0.6ml EP管,分别标记A 管和B-TransV管。

2、准备转染试剂(TransVB-Hi转染试剂)、 H-DMEM基础培养基(不含FBS)、无双抗 H-DMEM完全培养基(含FBS=10%)、目的质粒(SC-mKate2-Puro-Vector),酒精喷洒外包装消毒。

3、制备Trans-VB-Vector 复合物:

a、转染时,细胞融合度需达到80%最合适。

b、在转染前30分钟,换新鲜的不含抗生素的完全培养液900ul/孔(含10%FBS,血清不影响转染效率)。

c、将标记的A 管和B-TransV管分别加入 100ul H-DMEM基础培养基,盖上盖贴封口膜。

d、质粒稀释:取3ug待转染质粒(SC-mKate2-Puro-Vector),加入到含100ul H-DMEM基础培养基的 A 管中;轻轻吹打混匀,贴封口膜,放置超净台(室温)静止5分钟,形成“A-Vector 复合物”。

e、转染试剂TransVB-Hi稀释:把8ul的“TransVB-Hi细胞转染试剂”加入到含100ul H-DMEM基础培养基的B-TransV管,轻轻混匀(吹打8-10次)。

f、将稀释后的转染试剂TransVB-Hi(B-TransV管)滴加入稀释的质粒A管中(切记此混合的顺序不能反向进行),轻轻混匀(不能震荡或旋涡,吹打3-5次),盖上盖,贴封口膜。放超净台(室温)放置 15 min,形成Trans-VB-Vector 复合物。

6孔板单孔细胞转染(siRNA、质粒、DNA)操作步骤(以SC-mKate2-Puro-Vector质粒转染293TLX细胞为例)。

4、转染与目的基因的检测:

a、将上述A管中大约210ul Trans-VB-Vector 复合物均匀(200ul枪头+10ul枪头)滴加入6孔板内的细胞培养液中。切记:每次在孔内的不同位置,缓慢滴加一滴)。十字方向,水平轻轻晃动培养板(约2-4次)。

b、放入培养箱( 37℃,5% CO2)正常培养,或放入实时动态活细胞成像系统动态 ,设置明场和红光拍照,动态监测转染效率。

c、转染后6h后,目的细胞293TLX开始表达mkate2红色荧光,并定位于细胞核中;转染18h小时,荧光表达量达到最大。

d、转染后监测培养 10-16h时,按照3.5ml /6孔板单孔换液完全培养基(含10%FBS,可含双抗);

e、转染48h时,可收集细胞,qPCR或WB检测目的基因、蛋白的表达。

5、注意事项:

a、TransVB-Hi转染试剂不能长时间放置空气中,需要避光保存和操作。

b、转染实验,需要注意生物安全和防护。

c、此试剂材料,仅限科研研究,不能用于临床或人体实验。

         病毒包装转染时间间隔照片和转染效率监测示例

1、293TLX细胞转染效率监测:
A、293TLX细胞转染0h时间间隔照片:


B、293TLX细胞转染4h时间间隔照片:
    

C、293TLX细胞转染8h时间间隔照片:

    

D、293TLX细胞转染12h时间间隔照片:

E、293TLX细胞转染24h时间间隔照片:
   

F、转染效率监测曲线:
a、293TLX细胞慢病毒包装转染效率监测和转染对细胞增殖影响的细胞生长增殖曲线

b、293TLX用于CRISPR-GFP-Luc质粒慢病毒包装的转染效率动态监测(转染2h后荧光开始表达)

c、293TLX用于CRISPR-GFP-Luc质粒慢病毒包装的转染荧光照片:



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